中科院广州生物医药与健康研究院陈永龙博士的研究团队成功利用CRISPR/Cas9系统在热带爪蛙中获得了高效的靶向基因破坏，该研究成果“Efficient RNA/Cas9-mediated genome editing in Xenopus tropicalis”于1月8日在线发表在DEVELOPMENT上。 

　　Clustered regularly interspaced short palindromic repeats (CRISPR)/CRISPR-associated (Cas)系统是细菌和古细菌为破坏外来核酸（如病毒和质粒）而进化出的一种免疫防御机制。利用改良了的II型CRISPR/Cas系统中的核心元件Cas9蛋白和guide RNA (gRNA) ，可对多种真核生物的基因组进行定向DNA双链切割，进而激活细胞内对DNA损伤位点的非同源末端连接修复或同源重组修复途径，由此达到对基因组DNA靶向修饰的目的。相比于之前报道的锌指核酸酶（ZFNs）和TALENs技术，CRISPR/Cas9系统更容易于构建，适合于开展大规模基因修饰。 

　　研究人员分别构建了10个热带爪蛙基因的gRNA，并通过显微注射将单个或两个gRNA与编码Cas9的mRNA共注射到热带爪蛙受精卵中，结果证实在10个基因中均造成了位点特异性突变，效率在45%到100%之间，且这些突变可通过种系遗传到下一代，重要的是研究人员在系统的脱靶分析中未检测到非特异性脱靶效应；同时证实这套系统可以在热带爪蛙胚胎中进行多基因位点同步突变。此外，还为CRISPR/Cas9系统在热带爪蛙中进行基因敲除的当代表型分析提供了例证。 

　　该研究表明CRISPR/Cas9系统是热带爪蛙靶向性基因编辑的一种简单、高效、可靠的工具。